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大肠杆菌培养 需37°恒温过夜培养

2014-06-09 10:35:06      家庭医生在线

  大肠杆菌是我们肠道里面的杆菌,这是一种很常见的杆菌,对于我们人体的健康是可谓是一把双刃剑,在不致病的情况下(正常状况下),可认为是互利共生(一般高中阶段认为是这种关系);在致病的情况下,可认为是寄生,而致病的话常常容易导致严重的腹泻和败血症,那么,大肠杆菌培养是怎么回事?针对这个问题我们来详细了解吧!

  大肠杆菌培养 需37°恒温过夜培养

  大肠杆菌的培养

  1. LB培养基配制:

  (液体培养基)

  ① 取1L的烧杯,加入适量的一蒸水(<1000ml),称取胰蛋白胨 10g , 酵母提取物 5g , Nacl 10 g 倒入烧杯中

  ② 加入磁子搅拌,至完全溶解

  ③ 用NaoH调PH=7.0,定容至1L

  ④ 分装后高压蒸汽灭菌

  (固体培养基)

  ① 在液体培养基的基础上加入琼脂糖:1L液体培养基→15g琼脂糖(用水先溶解) ② 在电炉子上边加热边搅拌至煮沸溶解

  ③ 分装后高压灭菌

  注意事项:

  ① 电炉子温度不要太高,烧杯直接加热时电炉子上要加石棉网

  高压灭菌时,瓶盖上要插上针头,防止灭菌时瓶盖喷出

  2. 倒平板:

  培养皿要提前进行灭菌、烘干,在超净工作台里,打开酒精灯,在酒精灯的火焰旁进行操作,倒完后做好标记

  3. 接种(平板划线分离法):

  接种环挑取大肠杆菌进行接种:图式:

  注意:每次划线前接种环都要灼烧灭菌,再冷却。

  4. 37°恒温培养箱培养:

  接种好的培养皿正置15分钟,然后倒置放入培养箱过夜培养

  大肠杆菌感受态的制备及转化

  感受态:细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。

  转化:是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。 一、制备:步骤

  从大肠杆菌DH5α的培养平板上挑取一个单菌落接于2mL

  LB液体培养基的试管中,37℃振荡培养过夜。

  ↓

  以1%的接种量将以上过夜培养物接种于液体培养基中

  ↓

  37℃振荡培养2~3h

  ↓

  将菌液转移到50mL离心管中,冰上放置10min

  ↓

  4000rpm,离心10min回收细胞

  ↓

  倒出培养液,将管倒置1min以便培养液流尽

  ↓

  用冰冷的0.1mol/L CaCl 2 10mL,悬浮沉淀

  ↓

  立即放在冰上保温30min

  ↓

  4℃,4000rpm,离心10min,回收细胞

  ↓

  用冰冷的0.1mol/L CaCl 2 2mL悬浮细胞(务必放冰上)

  ↓

  分装细胞,每200μl一份。此细胞为感受态细胞。

  二、转化:步骤:

  在200μl新鲜配制的感受态细胞中加入质粒 DNA2μl(≤50ng),

  混匀同时做以下对照管

  (受体菌对照:200μl感受态细菌+2μl无菌水 质粒对照:200μl 0.1mol/L CaCl 2溶液+2μl质粒)

  ↓

  冰上放置30min

  ↓

  将管放到42℃循环水浴热冲击90s

  ↓

  取出,迅速冰浴2min

  ↓

  每管加800μl LB液体培养基,37℃慢摇复苏1h

  ↓

  取50μl已转化的感受态细胞或对照样品, 各分别涂在含有或不含有氨苄青霉素的培养皿中

  ↓

  待吸干菌液后,倒置培养皿,于37℃培养过夜

  ↓

  次日在含氨苄青霉素的培养皿上长的菌落即为含有质粒的大肠杆菌(即转化成功)

  【温馨提醒】:对于人体而言,当身体免疫力降低的时候,才比较容易感染到大肠杆菌这一病毒。大肠杆菌必须尽早治疗,以免日后给生命健康带来隐患。

(责任编辑:付子颜 )

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